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色譜常見十四種使用問題的詳細(xì)解答

更新時間:2015-01-09      點擊次數(shù):2921

色譜常見十四種使用問題的詳細(xì)解答

問:用HPLC進行分析時保留時間有時發(fā)生漂移,有時發(fā)生快速變化,原因何在?如何解決?
  答:關(guān)于漂移問題:
  1、溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定
  2、流動相發(fā)生變化,解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
  3、柱子未平衡好,需對柱子進行更長時間的平衡
  關(guān)于快速變化問題
  1、流速發(fā)生變化,解決辦法是重新設(shè)定流速,使之保持穩(wěn)定
  2、泵中有氣泡,可通過排氣等操作將氣泡趕出。
  3、流動相不合適,解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進行適當(dāng)混合
  問:色質(zhì)聯(lián)用中毛細(xì)柱的選擇應(yīng)注意什么問題?
  答:1、柱效要高
  2、熱穩(wěn)定性好
  化學(xué)惰性強
  具體選擇應(yīng)注意
  1、柱極性。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進行分析
  2、柱子內(nèi)徑。內(nèi)徑大小決定柱容量
  3、液膜厚度。分析樣品溫度一不一樣,對膜厚有不同要求,溫度高液膜要厚,溫度低液膜要薄
  4、柱長度。柱越長,柱效越高,分離效果越好,但也存在吸附問題,柱子過長,分析時間長,因此要根據(jù)樣品考慮柱子長度
  5、外涂層(柱體)的選擇
  6、另外還有儀器型號、分析對象等因素

問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
  答:1、篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
  2、存在干擾峰,解決辦法為使用較長的柱子,改換流動相或更換選擇性好的柱子
  ( 問:從那些方面可以簡單判別毛細(xì)管柱子的熱穩(wěn)定性好壞?
  答:1、分配容量(或容量因子)K,好的柱子在高溫運行后,分配容量K不應(yīng)有明顯的下降,否則,說明柱子的熱穩(wěn)定性不好。
  2、理論塔板數(shù)n,熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后,理論塔板數(shù)應(yīng)基本保持恒定
  3、柱子的極性。熱穩(wěn)定性好的柱子,高溫前后極性變化不大,具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒有大的變化。
  4、噪聲。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后,噪聲不能增加.
  5、柱子的去活層,毛細(xì)管柱子涂固定液前內(nèi)部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質(zhì)量好的毛細(xì)管柱子高溫后,去活層
  不應(yīng)該變化,表現(xiàn)在對強極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。

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